日韩欧美亚洲-人妻熟女一区二区三区-久草国产视频-av手机在线-伊人影院综合-国产一区二区三区高清-免费淫片-久久不射影院-欧美国产日韩精品-国产亚洲网站-久久短视频-欧美精品另类-国产精品一区电影-波多野结衣中文字幕一区-日韩三级av在线-婷婷综合亚洲-黄色免费一级视频-国产破处在线-国产精品视频在-国产乱强伦一区二区三区

客戶咨詢熱線:
15021010459
首頁 > 技術文章 > 大腸桿菌蛋白表達感受態細胞的制備

大腸桿菌蛋白表達感受態細胞的制備

更新時間:2023-10-07

閱讀:1452

大腸桿菌蛋白表達系統是目前應用*泛,也是實惠的蛋白表達系統。E. coli具有遺傳背景清楚、細胞增殖快、表達量高、穩定性好和抗污染能力強等特點,適用于多種屬蛋白的表達。本文主要講述了大腸桿菌蛋白表達實驗中感受態細胞制備實驗流程和原理。

圖片




01
感受態細胞的概念

COMPETENT
圖片

感受態,是指宿主細胞最容易接受外源基因并實現將其轉化的一種生理狀態,它是由受體菌的遺傳性狀所決定的,同時也受菌齡以及外界環境因子的影響, 比如Ca2+就可以大大促進轉化的作用。細胞的感受態一般出現在對數生長期,新鮮幼嫩的細胞是制備感受態細胞和進行成功轉化的關鍵。

圖片



02
感受態細胞制備的原理

制備感受態細胞的方法是用預冷的CaCl2處理對數生長期的細菌,即用低滲CaCl2溶液在低溫(0℃)時處理快速生長(進入對數生長期)的細菌,從而獲得感受態細胞。此時細胞膨脹成球形,外源DNA分子在低溫條件下易形成抗DNA酶的羥基-鈣磷酸復合物粘附在細胞表面,通過熱激處理促進細胞對外源DNA分子的吸收。轉化效率非常高。此方法的關鍵在于選用的細胞必須處于對數生長期,實驗操作必須在低溫無菌環境下進行。



03
大腸桿菌感受態細胞的制備實驗


01
實驗儀器及試劑
  • 儀器:超凈工作臺,搖床,高壓滅菌鍋,培養箱,制冰機,超低溫冰箱,離心機,接種環,試管,搖瓶(2L),平板,移液槍,槍頭,離心管(500mL),EP管(1.5mL),藍蓋瓶,泡沫箱

  • 試劑:CaCl2溶液:PIPES 1.51g,CaCl2•2H2O 4.41g,甘油 75ml,pH=7.0,定容至500ml。

LB培養基(固體、液體):Tryptone 1.00g,Yeast 0.50g,NaCl 1.00g,定容至100ml。(固體培養基加入1.5%的瓊脂)

抗性:卡那霉素,氨卞青霉素,氯霉素,四環素。

  • 材料:感受態菌株


02
實驗方法及操作步驟
  • 取-80℃凍存的感受態菌株,用接種環劃線分離接種于固體平板上(平板抗性根據感受態選擇),做好標記,倒置于37℃培養箱培養過夜。
  • 第二天,從平板上挑取單個菌落,接種至含有4ml LB培養液(抗性根據感受態選擇)的試管中,37℃,195rpm,震蕩培養過夜。次日取菌液4ml接種至含有400ml LB培養基(抗性根據感受態選擇)的2L搖瓶中,37℃,200rpm震蕩培養約2-3小時。
  • 當菌落OD600nm值達到0.3-0.5時,將搖瓶取出放置于冰上10-15min。在無菌條件下把菌液倒入500ml的預冷的離心管中,離心4℃,3000r,8min。
  • 棄去上清,加入約200ml的預冷的CaCl2溶液,吹打混勻,懸浮菌體,放入冰浴30min。
  • 離心4℃,3000r,8min,棄去上清,加入約8ml預冷的CaCl2溶液,重新懸浮菌體。
  • 將用CaCl2溶液處理后的菌體分裝于1.5ml的EP管中,每管110ul,保存于-80℃的超低溫冰箱中。



04
感受態細胞測試

隨機取1支本次制備的感受態細胞,轉化一個以前轉化成功的質粒,從轉化平板上的菌落數及表達鑒定的SDS-PAGE電泳圖(看是否出現其他的雜帶及蛋白表達情況)判斷感受態的效價。如果效價好,這批感受可以用;否則,要重新制備。


注意事項

圖片
1、每次取感受態細胞時,注意查看庫存,保證庫存不低于15支,少于15支時要及時制備。
1、菌株生長在對數時進行CaCl2處理。
2、全程操作要【低溫無菌】。
3、用CaCl2溶液懸浮菌體時要均勻,不要有塊狀。
4、常用感受態細胞的選擇抗性:BL21(DE3)無抗性;BL21 Codon plus(DE3)具有氯霉素抗性;OrigamiB(DE3)具有卡那霉素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性質粒的表達;BL21(DE3)plysS具有氯霉素抗性;Rosetta(DE3)具有氯霉素抗性;Shuffle具有鏈霉素抗性或不用抗性。


牛av| 欧美影院一区二区 | 狠狠影院 | 丁香婷婷在线观看 | 久久xx| 永久av网站| www.五月天婷婷.com | 久久国产传媒 | 亚洲另类一区二区 | 黄色的网站免费观看 | 久久手机视频 | 成人免费一级片 | 亚洲一区成人在线 | 美女被到爽高潮视频 | 亚洲亚裔videos黑人hd | 国产毛茸茸| 亚洲免费观看高清 | 国产一区二区综合 | 日本视频免费在线播放 | 51吃瓜网今日吃瓜 | 国产精品一区二区三区线羞羞网站 | 亚洲色婷婷一区二区三区 | 上海毛片 | 俄罗斯精品一区二区三区 | 狠狠综合久久av一区二区 | 少妇精品 | 色久天堂| 成人精品视频 | 最好看的mv中文字幕国语电影 | 国产伦精品一区二区三区免.费 | 日韩中文字幕在线不卡 | 里番acg★同人里番本子大全 | 亚洲欧美综合 | 蜜桃av免费看 | 中文字幕视频一区二区 | 七仙女欲春2一级裸体片 | 亚洲一区二区三区观看 | 欧美黑人性猛交xxxx | 五月婷婷六月丁香综合 | 天堂av中文在线 | 手机看片福利在线 | 亚洲中文字幕在线一区 | 人妻无码一区二区三区免费 | 很黄的网站在线观看 | h片在线免费 | 日韩国产欧美在线视频 | 夜夜爱视频 | 国产精品女同 | 色狠狠综合 | 两性午夜免费视频 | 中文字幕在线看 | 美女涩涩网站 | 国产精品人人做人人爽 | 91精品一区二区三区在线观看 | 国产综合福利 | 色玖玖综合 | 91精品国产乱码久久 | 日韩精品在线观看一区 | 日本国产中文字幕 | 中文字幕天堂 | 天天操天天操天天干 | 女生和男生一起插插插 | 成人不卡视频 | 精品国产乱码久久久久久久 | 中国一级特黄毛片大片 | 玉米地疯狂的吸允她的奶视频 | 喷水av| 日韩欧美中文字幕一区二区三区 | 欧美老女人性视频 | 日本欧美一区二区三区不卡视频 | 激情在线观看视频 | 1024在线视频 | 欧美美女在线观看 | 日韩视频一区二区三区在线播放免费观看 | 成人狠狠干| 婷婷成人av| 双性皇帝高h喷汁呻吟 | 国产三级三级三级 | 日日操夜夜爽 | 欧美日韩三级视频 | 亚洲射色| 夜夜综合网 | 国产一区二区三区免费看 | 自拍第1页 | 91漂亮少妇露脸在线播放 | 久久a毛片 | 精品香蕉99久久久久网站 | www.成人在线 | 精品婷婷色一区二区三区蜜桃 | 激情都市一区二区 | 超碰在线99 | 朱竹清到爽高潮痉挛 | 91原创国产 | 国产日韩二区 | 一区二区美女视频 | 日本精品免费一区二区三区 | 成人毛片基地 | 久草新视频| 中文字幕1区2区3区 妖精视频一区二区三区 | 日本少妇影院 | 亚洲五月网 | 国产一区二区麻豆 | 免费黄色的网站 | 99嫩草 | www在线播放 | 亚洲美女自拍 | 午夜视频网站在线观看 | 欧美精品在线视频观看 | 国产免费一区二区三区最新不卡 | 少妇精品一区二区 | 我要看免费的毛片 | 狠狠人妻久久久久久综合 | 亚洲国产精品视频在线观看 | 久久综合久久综合久久综合 | 啦啦啦免费高清视频在线观看 | 久久精品三级视频 | 亚洲一区二区三区四区五区六区 | 中文字幕8 | 九一网站在线观看 | 欧美成网 | 91麻豆产精品久久久久久 | 欧美一区在线视频 | 美女一级片| 亚洲久久成人 | 国产美女黄色 | 亚洲精品另类 | 少妇aaaa| 在线免费看黄色片 | 性生活视屏 | 精品一区二区在线观看 | 国产精品麻豆一区 | 国产精品高潮AV无码 | 国精产品乱码一区一区三区四区 | av不卡免费观看 | 日本少妇bbwbbw精品 | av观看在线免费 | 日韩欧美精品中文字幕 | 国产免费a级片 | 在线中文一区 | 欧美色欧美色 | 成人日韩精品 | 一区二区日韩av | 免费看黄色三级 | 国产一区二区三区精品视频 | 性欧美熟妇videofreesex | 青青青草视频在线 | www夜夜| 老师用丝袜脚帮我脚交 | xxxxx在线视频 | 黄色网页免费观看 | 国产做爰xxxⅹ久久久精华液 | 无套白嫩进入乌克兰美女 | 久久在线中文字幕 | 国产精品午夜福利 | 野外吮她的花蒂高h在线观看 | 免费二区 | 91综合网| www.亚洲综合 | 四虎国产视频 | 青青青视频在线播放 | 91爱啪啪| 国产在线观看免费 | 亚洲成人av一区二区 | 精品人妻无码一区二区三区换脸 | 天堂一区 | 日本丰满熟妇videossex一 | 亚洲毛片网| 黄色免费看视频 | 91日批视频 | 日韩爱爱爱 | 男人用嘴添女人下身免费视频 | 久久综合免费 | 黄色免费网站 | 亚洲欧美在线综合 | 国产精品啊啊啊 | www.色天使| 国产欧美综合视频 | 成在人线av| 中国黄色一级大片 | 欧美bbbbbbbbbbbb精品 | 91亚洲一线产区二线产区 | 免费在线看黄网址 | 欧美精品日韩精品 | 久久中文字幕人妻 | 成人性生交大免费看 | 殴美一级片 | 欧美怡红院视频一区二区三区 | 成人免费观看视频网站 | 精品国产乱码久久久久久108 | 超碰免费在线播放 | 日本成人在线播放 | 久久草网站 | 91小视频在线观看 | 黄色99视频 | 国产欧美精品一区二区三区 | 在线免费观看视频网站 | 黄色av网 | 超碰三级 | 哪个网站可以看毛片 | 亚洲国产日韩一区无码精品久久久 | 日本h视频在线观看 | 黄网在线看 | 国产精品久久久久久亚洲影视 | 欧洲精品在线观看 | 国产真人真事毛片 | 女同性恋一区二区三区 | 亚洲av无码一区二区三区人 | 久久成人久久 | 日本久久伊人 | 五十路熟母 | 二区三区在线 | 亚洲伦理在线观看 | 久久精品视频播放 | 亚洲AV成人无码久久 | 青青草五月天 | 黄色成人在线免费观看 | 欧美一级二级片 | 精品一区二区在线观看 | 久久久久99精品成人片三人毛片 | 欧美爱爱小视频 | 厕拍极品| 国产一在线观看 | 秋葵视频在线 | 日本一二三不卡视频 | 黄色免费一级视频 | 欧美 日韩 国产 高清 | 国产在线一| 视频在线观看电影完整版高清免费 | 色婷婷狠狠操 | 天天干国产 | 都市激情亚洲色图 | 丝瓜色版 | av国产一区 | 欧美性潮喷xxxxx免费视频看 | 啪啪国产精品 | 国产第一页精品 | 国产女人精品视频 | 国产精品区在线观看 | 色欲欲www成人网站 欧美人与禽猛交乱配视频 亚洲免费精品视频 | 亚洲激情欧美 | 黄色大片免费网站 | 女性爱爱视频 | 清冷学长被爆c躁到高潮失禁 | 亚洲精品一区二三区 | 精品视频一二三 | av一二三四| 日本一本久草 | 精品成人免费视频 | 天天爱综合 | 色亚洲色图 | 男女日皮视频 | 91浏览器在线观看 | av在线电影院 | 国产精品66 | 亚州激情 | 中文字幕日本一区二区 | 制服丝袜在线视频 | 久久久久久久影院 | 性生活av | 欧美日韩国产一区二区三区 | 日韩欧美亚洲国产精品字幕久久久 | 中文字字幕在线中文乱码电影 | 亚洲一区二区三区黄色 | 亚洲色图第一页 | 日本激情久久 | 国产一区二区精品 | 久久久久久久久电影 | 性欧美精品男男 | 乱色精品无码一区二区国产盗 | 神马午夜在线 | 波多野结衣中文字幕一区二区三区 | 日本一区二区三区视频在线观看 | 国产亚洲无 | 自拍视频在线播放 | 毛片网站有哪些 | 亚洲精品乱码久久久久久9色 | 亚洲偷偷自拍 | 国精品无码一区二区三区 | 欧美极品第一页 | 5d肉蒲团之性战奶水 | 亚洲欧洲在线看 | 黄色片小视频 | 欧美日韩视频一区二区三区 | 婷婷伊人五月 | 91超碰免费 | 国产一区二区三区中文字幕 | 看黄色网址 | 国产精品久久久不卡 | 国产在线欧美日韩 | 日本三级久久 | 2019狠狠干 | 欧洲视频一区 | 国产又黄又猛又粗又爽 | 欧美日本久久 | 看全色黄大色黄女片18 | 日韩中文在线字幕 | 国产麻豆交换夫妇 | 福利视频网址 | 亚洲高清不卡 | 免费在线看黄色片 | 国产欧美精品一区二区色综合朱莉 | 精品人妻在线播放 | 免费啪啪小视频 | 中文字幕色哟哟 | 超碰狠狠操 | 亚洲综合视频网 | 性久久久久 | 狠狠操在线视频 | 伊人久久综合影院 | 男女免费视频网站 | 好吊一二三区 | 日韩国产毛片 | 成人午夜av | 在线观看视频中文字幕 | 黄色一级大片免费看 | 国产白丝袜美女久久久久 | 久久久高清免费视频 | 久久久久久久香蕉 | 久久一 | 欧美日韩高清在线 | 日本最新中文字幕 | 美女扒开尿口让男人捅爽 | 东北少妇不戴套对白第一次 | 麻豆成人精品 | 亚洲AV成人无码精电影在线 | 免费观看一区二区三区 | 91久久精品日日躁夜夜躁国产 | 奇米成人 | 国产污污在线观看 | 少妇太紧太爽又黄又硬又爽 | 黄色网址进入 | 欧美午夜精品久久久久久浪潮 | 香蕉黄色网| 少妇免费毛片久久久久久久久 | 超碰资源总站 | 天天想你在线观看完整版电影免费 | www国产在线| 日本一区二区三区久久 | 国产伦理精品 | 国产图区 | 久久国产精品一区二区 | 欧美激情精品久久久久 | 91成人毛片 | 丰满少妇一区二区三区专区 |